Здравствуйте, в этой статье мы постараемся ответить на вопрос: «Смывы на стафилококк и смывы на бгкп что это такое». Если у Вас нет времени на чтение или статья не полностью решает Вашу проблему, можете получить онлайн консультацию квалифицированного юриста в форме ниже.
При проведении микробиологических смывов “Единая Санитарная Служба” ориентируется на правила, приведенные в принятом Роспотребнадзором указе МУК 4.2.3591-19. Согласно данному правовому акту, забор материала выполняется с применением стерильных и специально обработанных тампонов. Смыв с оборудования необходимо брать до начала смены или после санобработки, для рабочих поверхностей применяется специальный трафарет. При больших размерах исследуемого объекта необходимо брать пробы из нескольких точек.
Процедура взятия смывов для микробиологических исследований
При взятии смыва с рук сотрудника нужно не менее 5 раз провести тампоном по ладоням, пальцам рук, ногтям, межпальцевой области. Для исследования санитарной одежды выбираются участки на рукавах, передней и верхней части изделия. Объем и количество смывов зависят от поставленных целей, особенностей деятельности предприятия, предмета исследования.
После проведения лабораторного изучения взятого материала клиенту выдается протокол с результатами. К итогам анализа прилагаются рекомендации по улучшению эпидемиологической и санитарно-гигиенической обстановки на изучаемом объекте. Советуем заказать микробиологическое исследование с целью выявления и исправления имеющихся нарушений на производстве. Такое решение позволит избежать проблем с контролирующими органами, гарантировать безопасность и качество выпускаемой продукции.
Бактерии группы кишечных палочек
Кишечные палочки (Бактерии группы кишечных палочек) В 1885 г. Эшерих открыл микроорганизм, который получил название Escherichia coli (кишечная палочка). Этот микроорганизм является постоянным обитателем толстого отдела кишечника человека и животных. Кроме Е. coli, в группу кишечных бактерий входят эпифитные и фитопатогенные виды, а также виды, этиология (происхождение) которых пока не установлена. К бактериям группы кишечных палочек относят роды Escherichia (типичный представитель Е. coli), Citrobacter (типичный представитель Citr. coli citrovorum), Enterobacter (типичный представитель Ent. aerogenes), которые объединены в одно семейство Enterobacteriaceae благодаря общности морфологических и культуральных свойств. Они характеризуются различными ферментативными свойствами и антигенной структурой.
Морфология
Бактерии группы кишечных палочек — это короткие (длина 1-3 мкм, ширина 0,5-0,8 мкм) полиморфные подвижные и неподвижные грамотрицательные палочки, не образующие спор.
Следует помнить, что не во всех случаях возбудитель может стать возбудителем заболеваний – подобное происходит при превышении предельно допустимой концентрации микроорганизмов. В нормативных документах указывается безопасный уровень, превышение которого и может вызвать различные осложнения. Обнаружение возбудителей осуществляется при помощи материалов, которые могут потенциально содержать бактерии или контактировать с больным.
Определение безопасности может проводиться в трех направлениях:
- анализ на наличие бактерий;
- установление количества;
- диагностика биохимических характеристик.
Первые варианты используются повсеместно, третий – при необходимости детального изучения возбудителя. В зависимости от целей исследования процедуры, которые необходимы для анализа, могут отличаться.
- Для выявления бактерий потребуется осуществить посев образца в пробирку, в которой будет находиться богатая на лактозу среда. Взятые образцы выдерживаются при температуре 37 C до 48 часов. В подобных условиях производится выращивание колоний группы кишечной палочки.
- Для определения числа бактерий такой же объем материала наносится на специальные чашки Петри. После проведения процедуры инкубации в термостате происходит рост колонии – в данном случае клетки получают название колониеобразующих единиц. С помощью подсчета КОЕ можно определить количество бактерий в 1 л.
- Биохимические свойства устанавливаются при помощи пробирок со средой Гиса. Добавляя необходимые компоненты, можно определить уровень сахаролитической активности микроорганизмов.
В отдельных случаях может использоваться ускоренный метод выявления бактерий группы кишечных палочек. После первичной обработки образца отделяется небольшой фрагмент, который помещается в стерильную пробирку вместе с комочком стерильной фильтровальной бумаги. Далее в емкость наливается среда ХБ или Хейфеца. Пробирка укладывается в термостат на период от 12 до 14 часов. В случае, если в пробе имеются БГКП, среда меняет свой цвет.
Особенности забора проб и проведения микробиологического анализа смывов
Наших заказчиков часто интересует, как происходит забор материалов для исследования. Смывы собирают стерильными салфетками или ватными тампонами, которые предварительно смачивают стерильным изотоническим раствором.
Существуют некоторые правила забора материала для анализов:
- Смывы с инвентаря и оборудования производят в санитарные дни после санитарной обработки или перед началом работы,
- Если смыв необходимо взять с больших площадей – столы, стены, тогда пробы берут в нескольких местах (для площади в 100*100 см).
- При сборе смывов с рук сотрудников общепита используют также стерильные тампоны или салфетки, которыми протирают тыльную часть кисти, затем ладонь не менее 5 раз, после чего межпальцевые участки и ногтевое ложе, а также зону под ногтями.
- Собирая смывы с санитарной одежды, необходимо протереть 4 участка площадью 5*5 см каждый: нижние части обоих рукавов, а также 2 участка с нижней и верхней части переда спецовки.
Заказав анализ микробиологических смывов в частном порядке до проверки контролирующего органа, любое предприятие общепита сможет заранее выявить имеющиеся проблемы, устранить их и тем самым благополучно избежать санкций и штрафов.
Как берут смывы в детском саду
Как правило, работники лаборатории при СЭС приглашаются руководством компаний, предприятий и фабрик для осуществления санитарно-бактериологического контроля. При этом важно изучить те объекты, которые используются при приготовлении, хранении, транспортировке пищи.
Поэтому в первую очередь микробиологические исследования – смывы проводятся в отношении:
- Посуды, оборудования, кухонного инвентаря, бытовых и столовых приборов и т.п.,
- Собственно продуктов – полуфабрикатов, сырья, готовых изделий, скоропортящихся продуктов питания и т.п.,
- Воды, используемой в процессе производства,
- Рук работающего персонала, рабочей одежды и рабочих поверхностей (столов, раковин, шкафов).
При изучении состава взятых проб работники лаборатории оценивают такие параметры, как:
- Итоговая обсемененность,
- Присутствие микроорганизмов Proteus,
- Наличие бактерий, вызывающих кишечные инфекции – БГКП,
- Присутствие сальмонеллы, легионеллы,
- Присутствие золотистого стафилококка,
- Общее микробное число (или ОМЧ).
Также результат исследования покажет эффективность обработки рабочих поверхностей, поможет установить долю обсеменения продукта питания, которая вносится во время технологического процесса – для сравнения работники лаборатории берут как первичные, так и вторичные пробы готовой продукции.
Помимо этого, в бактериологической лаборатории санэпидемслужбы можно заказать микробиологическое исследование грибка, плесени, дрожжей.
Изучение микрофлоры смывов необходимо в следующих целях:
- • Оценка санитарно-гигиенической обстановки в лечебно-профилактических, учебных детских заведениях, на предприятиях общественного питания,
- • Исследование бактериологической загрязненности рук персонала, окружающих предметов, оборудования и техники (для этого проводится взятие смывов с оборудования),
- • Установление путей распространения различных инфекционных заболеваний,
- • Установление эпидемиологической безопасности выпускаемой на предприятии продукции,
- • Минимизация рисков отравлений, возникновения различных заболеваний, связанных с приемом или использованием загрязненной продукции и др.
Благодаря регулярно проводимым микробиологическим исследованиям и принимаемым собственниками компаний мерам повышается качество выпускаемой продукции и её безопасность для потребителей. Этот метод исследования очень актуален и востребован благодаря его объективности и точности.
Определение бактерий группы кишечной палочки (БГКП) методом смывов
Полученные смывы засевают на желточно-солевой агар в чашке Петри и параллельно на 6,5% солевой бульон (среда накопления). На желточно-солевой агар можно сделать посев тампоном. Бульон предварительно разливают в пробирки по 5 мл и в каждую засевают 0,2-0,3 мл смыва. Посевы инкубируют при 37° С в течение 24 ч.
Проверки санитарными службами проводятся во всех местах, которые могут явиться источниками массового заражения людей.
- Водозаборные станции.
- Салоны бытовых услуг.
- Бассейны, бани, сауны, аквапарки.
- Столовые, рестораны, кафе, другие места общественного питания.
- Объекты пищевой промышленности.
- ЛПУ (лечебно-профилактические учреждения).
- ДОУ (дошкольные образовательные учреждения).
Метод удобен тем, что на поверхность среды захватываются все микроорганизмы, находящиеся на исследуемом участке объекта, но он не дает представления об общей обсемененности предметов из-за ограниченности исследуемой площади. Его рекомендуют применять при небольшой бактериальной загрязненности.
Изучение микрофлоры смывов необходимо в следующих целях:
- • Оценка санитарно-гигиенической обстановки в лечебно-профилактических, учебных детских заведениях, на предприятиях общественного питания,
- • Исследование бактериологической загрязненности рук персонала, окружающих предметов, оборудования и техники (для этого проводится взятие смывов с оборудования),
- • Установление путей распространения различных инфекционных заболеваний,
- • Установление эпидемиологической безопасности выпускаемой на предприятии продукции,
- • Минимизация рисков отравлений, возникновения различных заболеваний, связанных с приемом или использованием загрязненной продукции и др.
Несмотря на некоторое сходство, на микробиологических питательных средах они способствуют образованию колонии другого цвета и вида.
Результат выдается заказчику услуги в форме протокола. Документ можно получить на электронную почту, забрать в офисе компании в бумажном виде.
Метод смывов. Этот метод является основным при отборе проб для исследования твердых поверхностей. Смывы с крупных плоских поверхностей (столы, подоконники, полы, стулья, оборудование, инвентарь и т.д.) производят перед началом рабочего дня, либо после санитарной обработки в санитарные дни.
Виды микробных загрязнений
Изобретение микроскопа положило начало микробиологии, которая не только выявила наличие микроорганизмов, но и установила их связь с возникновением заболеваний у людей. Появились первые научно обоснованные санитарные правила, рекомендации и законы, охраняющие здоровье граждан.
Изучение инфекционных заболеваний людей и животных привело ученых к выводу о том, что источниками заражения являются они сами. Бактерии, являющиеся причиной болезней, попадают на продукты питания, предметы быта с микрочастицами кала или каплями слюны. Так были определены две большие группы бактериальных загрязнений.
- Оральная группа, представленная микроорганизмами, обитающими в полости рта.
- Фекальный вид загрязнения бактериями, которые попадают во внешнюю среду из кишечника людей и животных.
Встал вопрос о том, присутствие какого вида бацилл точно свидетельствует об инфекционной опасности объекта или продукта питания. Ведь в кишечнике и ротовой полости сотни различных видов микробов. Была проведена колоссальная работа по выявлению показательных представителей микрофлоры. Определили две группы:
- стафилококки как показатель орального обсеменения;
- бактерии группы кишечной палочки (БГКП) для определения фекального загрязнения.
Во рту могут находиться разные виды стафилококков. Присутствие любого из стафилококков в большом количестве будет свидетельствовать о загрязнении. Но есть среди них особо показательный стафилококк. Это золотистый стафилококк, получивший свое название по цвету колоний, которые он создает на лабораторных средах.
БГКП в отличие от стафилококков составляют разнородные микроорганизмы: цитробактеры, эшерихии, шигеллы, иерсинии и другие бациллы. Их всех роднит между собой похожесть на главного представителя кишечной флоры. Это кишечная палочка. Хотя их свойства похожи, на лабораторных средах они образуют колонии разного вида и цвета.
Среди представителей БГКП эшерихии отличаются по свойствам размножения от цитробактера и энтеробактера. Практически это используется для определения давности микробного обсеменения. Присутствие эшерихий свидетельствует о недавнем загрязнении. Наличие цитробактера или энтеробактера означает, что с момента появления БГКП на исследуемом месте прошло несколько недель.
На основании данных изучения микроорганизмов разрабатывались правила и рекомендации, которые легли в основу создания регламентирующей документации.
- СанПиН – санитарные правила и нормы.
- МУ – методические указания.
- Приказы.
- Санитарные правила.
Контроль загрязнения БГКП в разных учреждениях
Проверки санитарными службами проводятся во всех местах, которые могут явиться источниками массового заражения людей.
- Водозаборные станции.
- Салоны бытовых услуг.
- Бассейны, бани, сауны, аквапарки.
- Столовые, рестораны, кафе, другие места общественного питания.
- Объекты пищевой промышленности.
- ЛПУ (лечебно-профилактические учреждения).
- ДОУ (дошкольные образовательные учреждения).
Это основные места, где существует риск инфекционных заболеваний или вспышек массовых пищевых отравлений. Поэтому в отношении этих объектов, особенно ЛПУ и ДОУ, санитарными службами ведется самый строгий надзор. Нарушение СанПиН или МУ работниками этих учреждений влечет за собой наложение суровых санкций, так как цена ошибки – здоровье людей и детей.
Согласно положениям СанПиН или МУ, утверждаются графики выхода специалистов в подконтрольные учреждения для взятия смывов на присутствие стафилококков и БГКП. СанПиН и МУ определяют периодичность плановых проверок и случаи экстренных обследований.
Главное правило плановых мероприятий на соблюдение требований СанПиН и МУ – внезапность приезда специалистов, чтобы застать и оценить истинное положение с бактериальной загрязненностью объекта.
План проверок составляется с учетом количества объектов на территории, возможностей лаборатории. Но не реже, чем установлено в СанПиН и МУ. Периодичность для разных учреждений установлена своя.
- ЛПУ контролируется дважды в год органами санэпиднадзора. Его собственная лаборатория проверяет стерилизацию инструментов, рук хирургического персонала еженедельно.
- Для клиник родовспоможения специалистами надзорной организации установлена ежеквартальная периодичность.
- Сотрудники ЛПУ регулярно проходят обследование на носительство золотистого стафилококка.
- Периодичность контроля ДОУ – ежеквартальные проверки.
6.2.1. Перед проведением работы поверхности в помещениях бокса и предбоксника (стены, пол, оборудование и др.), а также внутренние поверхности бокса с ламинарным потоком воздуха обрабатывают раствором дезинфицирующего средства, разрешенного к применению в установленном порядке.
6.2.2. Через 45 — 60 мин после обработки в бокс вносят все необходимые для работы материалы и инструменты, кроме образцов изделий.
6.2.3. Перед началом работ бокс с ламинарным потоком воздуха включают на время, достаточное для обеспечения полного обмена воздуха, а затем помещают в него необходимый для работы материал.
6.2.4. В боксе и предбокснике перед работой включают бактерицидные облучатели.
6.2.5. Инструменты, посуду и спецодежду, используемые в работе, предварительно стерилизуют при следующем режиме: температура 32 °С, время стерилизационной выдержки — 90 мин; изделия из резин (перчатки и т.д.) — при температуре 120 °С в течение 60 мин.
6.2.6. Перед посевом исследуемый материал вносят в предбоксник, предварительно снимая наружную мягкую упаковку. В предбокснике пакеты, биксы протирают снаружи с помощью стерильного пинцета (корнцанга) стерильной салфеткой (ватным тампоном), обильно смоченной раствором дезинфицирующего средства, обладающего спороцидными свойствами, разрешенного к применению в установленном порядке, и оставляют на 30 мин. При поступлении изделий, упакованных в два слоя (бумага, перманганаты, ткани), первый слой снимают в предбокснике и изделия во внутренней упаковке сразу переносят в бокс.
6.2.7. Перед входом в бокс работники лаборатории тщательно моют руки теплой водой с мылом, вытирают их стерильным полотенцем (салфеткой), надевают в предбокснике бахилы, стерильные халаты, 4-слойные маски, шапочки и стерильные перчатки.
6.2.8. В процессе посева в боксе проверяют обсемененность воздуха. Для этого на рабочий стол ставят 2 чашки с мясопептонным агаром (МПА), открывая их на 15 мин, затем чашки помещают в термостат при температуре 37 °С на (48 ± 2) ч. Допускается рост не более трех колоний неспорообразующих сапрофитов.
Для контроля стерильности питательные среды после изготовления и стерилизации помещают в термостат при температуре 37 °С на (48 ± 2) ч.
Бульон Сабуро контролируют полностью (всю приготовленную серию пробирок или колб).
Для тиогликолевой среды термостатируют 1 % от общего числа приготовленных пробирок или колб каждой серии. Для проведения исследований материала на стерильность эту часть сред не используют.
Что обычно изучают при проведении микробиологических исследований
Как правило, работники лаборатории при СЭС приглашаются руководством компаний, предприятий и фабрик для осуществления санитарно-бактериологического контроля. При этом важно изучить те объекты, которые используются при приготовлении, хранении, транспортировке пищи.
Поэтому в первую очередь микробиологические исследования – смывы проводятся в отношении:
При изучении состава взятых проб работники лаборатории оценивают такие параметры, как:
Также результат исследования покажет эффективность обработки рабочих поверхностей, поможет установить долю обсеменения продукта питания, которая вносится во время технологического процесса – для сравнения работники лаборатории берут как первичные, так и вторичные пробы готовой продукции.
Помимо этого, в бактериологической лаборатории санэпидемслужбы можно заказать микробиологическое исследование грибка, плесени, дрожжей.
Санитарно микробиологическое исследование молока и молочных продуктов
Для оценки санитарно-гигиенического состояния предприятий общественного питания, предприятий пищевой промышленности, лечебно-профилактических и детских учреждений проводят исследование смывов с рук персонала и предметов окружающей обстановки.
В зависимости от цели исследования определяют:
1. Наличие БГКП.
2. Наличие S. aureus.
3. Общее количество бактерий.
Исследования на патогенную микрофлору проводят только по эпидпоказаниям.
На предприятиях общественного питания и в детских учреждениях исследования обычно ограничивают выявлением БГКП (как показатель фекального загрязнения) и S. aureus.
В отделениях хирургического профиля (операционных, отделениях реанимации, интенсивной терапии и т. д.), кроме вышеуказанных показателей, определяют количественную обсемененность микроорганизмами, наличие синегнойной палочки и протея.
Отбор проб. Взятие проб осуществляют методом смывов. Используют ватные тампоны (палочка с намотанной на нее ватой вставлена в пробирку) или салфетки 5×5 см, которые захватывают стерильным пинцетом. Тампоны и салфетки увлажняют, помещая их в пробирки с 2 мл изотонического раствора натрия хлорида.
Примечание. Марлевые салфетки, предварительно завернутые по одной в бумажные пакетики, и ватные тампоны, помещенные в пробирки, стерилизуют в стерилизационном шкафу 1 ч при 160° С.
Смывы с рук делают в следующей последовательности: начинают с левой руки, с участков меньшей загрязненности — протирают тыльную сторону руки от кисти к пальцам, затем ладонную сторону, между пальцами и под ногтевым ложем. Этим же тампоном в такой же последовательности производят смывы с правой руки.
Анализы смывов с рук и оборудования
- О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. Москва, ГЭОТАР-МЕД, 2001.
- João P. S. Cabral. Review. Water Microbiology. Bacterial Pathogens and Water. Int. J. Environ. Res. Public Health 2010, 7, 3657-3703
- Badger, J.D.; M.F. Stins; K.S. Kim (1999). Citrobacter freundii Invades and Replicates in Human Brain Microvascular Endothelial Cells. Infection and Immunity 67 (8): 4208–15.
- Jia-Yi Tan, Wai-Fong Yin, and Kok-Gan Chan. Quorum Sensing Activity of Hafnia alvei Isolated from Packed Food. Sensors (Basel). 2014 Apr; 14(4): 6788–6796.
- J. Michael Janda and Sharon L. Abbott. The Genus Hafnia: from Soup to Nuts. Clin Microbiol Rev. 2006 Jan; 19(1): 12–28.
Методы микробиологического контроля почвы. Методические рекомендации
Термостат для температурного режима (37 +/- 1) °C
Баня водяная с подогревом до температуры 100 +/- 2 °C
Прибор для мембранной фильтрации под вакуумом и устройство для создания разрежения (0,5 — 1,0) атм.
Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания до 1000 г и допустимой погрешностью +/- 10 мг — ГОСТ 24104
Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 100 °C с ценой деления шкалы 0,5 °C
РН-метр, обеспечивающий измерение с погрешностью до 0,01
Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды — ГОСТ 6709
Стерилизатор суховоздушный для температурного режима (180 +/- 5) °C
Автоклав или стерилизатор паровой — ГОСТ 19569
Холодильник, позволяющий поддерживать температуру +2 — 4 °C
Облучатель бактерицидный
Горелка газовая или спиртовая
Петли бактериологические
Пинцеты для работы с мембранными фильтрами
Пипетки градуированные 1-го и 2-го классов точности вместимостью 1 куб. см, 5 куб. см, 10 куб. см — ГОСТ 29227
Пробирки ГОСТ 25336-82
Чашки бактериологические (Петри) — ГОСТ 23932-90
Допускаются к использованию коммерческие, питательные среды, диагностические препараты и системы идентификации отечественного производства, а также зарубежных фирм, предназначенные для целей описываемых методов. Питательные среды и биологические препараты зарубежного производства должны иметь международный сертификат качества ISO 9000 или EN 29000. При использовании следует руководствоваться рекомендациями фирмы-производителя.
Бактерии группы кишечной палочки (БГКП) давно уже считаются удобными микробными индикаторами. Показатель «бактерии группы кишечных палочек» (БГКП) приведен в соответствие с принятой международной номенклатурой, который идентичен показателю «общие колиформные бактерии». К колиформам относятся грамотрицательные бактерии, имеющие форму палочек, способных развиваться в присутствии солей желчных кислот или других поверхностно-активных агентов с аналогичной способностью к подавлению роста и способных ферментировать лактозу при t (35 — 37 °C) с образованием кислоты, газа и альдегида, то есть на среде Эндо лактозоположительные колонии дают отпечаток в течение 24 — 48 ч. Они оксидазоотрицательные и не образуют спор.
Бактерии группы кишечной палочки включают следующие роды: эшерихия, клебсиелла, энтеробактер, цитробактер и серрации.
При анализе почв, для которых предполагается невысокая степень фекального загрязнения, рекомендуется проводить определение титрационным методом. В качестве ускоренного метода для анализа слабозагрязненных почв рекомендуется использовать метод мембранной фильтрации. При анализах проб с предполагаемой высокой степенью фекального загрязнения можно проводить прямой поверхностный посев разведения суспензии на поверхность среды Эндо.
Для исследования используют предварительно подготовленные почвенные суспензии и разведения по описанной выше методике.
В качестве ускоренного метода для обнаружения колиформных бактерий целесообразно использовать метод мембранных фильтров.
Для микробиологических целей используются фильтры с диаметром пор 0,45 мкм и размером диска 35 или 47 мм и другие фильтрующие мембраны с аналогичной способностью фильтрации, имеющие сертификат качества. Метод основан на фильтрации установленного объема — 5,0 — 10,0 куб. см почвенной суспензии первого разведения (1:10) — через мембранные фильтры, выращивании посевов на дифференциальной, питательной среде с лактозой и последующей идентификации колоний по культуральным и биохимическим свойствам. Для того чтобы облегчить фильтрование почвенной суспензии через мембранный фильтр, желательно до фильтрования провести предварительную обработку.
Мембранные фильтры должны быть подготовлены к анализу в соответствии с указаниями изготовителя.
Воронку и столик фильтровального аппарата обтирают марлевым (ватным) тампоном, смоченным спиртом ректификованным, и фламбируют. После охлаждения на столик фильтровального аппарата кладут фламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр, прижимают его воронкой.
В воронку прибора для фильтрования наливают отмеренный объем, затем создают вакуум.
При посеве нескольких объемов одной пробы следует фильтровать через один фильтровальный аппарат без обеззараживания сначала меньшие, а затем большие объемы, меняя каждый раз фильтры. Перед фильтрованием каждой новой пробы прибор обеззараживают.
Следует начинать с фильтрования проб, которые предположительно не загрязнены, а затем фильтровать загрязненные пробы. После окончания фильтрования и осушения фильтра отключают вакуум, воронку снимают, фильтр осторожно поднимают за край фламбированным пинцетом и переносят его, не переворачивая, на питательную среду Эндо с добавлением розоловой кислоты, разлитую в стерильные чашки Петри, избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Эта среда используется только при работе методом мембранной фильтрации. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.
Под каждым фильтром на дне чашки делают надпись с указанием объема профильтрованной пробы, номера и даты посева. На одну чашку можно поместить 3 — 4 фильтра с условием, чтобы фильтры не соприкасались.
Чашки с фильтрами ставят в термостат дном вверх и инкубируют посевы при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч.
Если на фильтрах нет роста или выросли колонии пленчатые, губчатые, плесневые, прозрачные, расплывчатые, выдают отрицательный ответ: отсутствие БГКП в исследуемой почве.
Анализ заканчивают через 24 ч.
Если на фильтрах обнаружен рост изолированных типичных лактозоположительных колоний: темно-красных, красных с металлическим блеском или без него или других подобного типа колоний с отпечатком на обратной стороне фильтра, подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и приступают к подтверждению их принадлежности к БГКП.
Для подтверждения наличия БГКП исследуют:
— все колонии, если на фильтрах выросло менее 5 колоний;
— не менее 3 — 4 колоний каждого типа.
Каждую выбранную изолированную колонию исследуют на:
— наличие оксидазной активности;
— принадлежность к Граму (микроскопия окрашенного по Граму препарата или постановка теста Грегерсена);
— ферментацию лактозы до кислоты и газа.
Для расчета индекса количества бактерий группы кишечных палочек, выросших в анализируемом объеме почвы, умножают на 1000 и делят на этот объем.
На 1 л дистиллированной воды берется 10 г пептона, 5 г хлористого натрия, 2,5 г глюкозы. В дистиллированную воду в начале добавляют пептон, хлористый натрий и кипятят до растворения ингредиентов, затем добавляют 10 мл реактива Андреде. Устанавливают рН 7,2 — 7,4, добавляют углевод и фильтруют. Среду разливают в стерильные пробирки с поплавками по 2 — 3 мл. Стерилизуют при 0,5 атм 20 мин.
Приготовление индикатора Андреде:
Фуксин кислый в количестве 1 г растворяют в 200 мл дистиллированной воды, добавляют 32 мл нормального раствора едкого натра. Полученную смесь настаивают в течение 3-х суток при комнатной температуре или в течение суток при 37 °С, после чего фильтруют. Реактив хранят во флаконе с притертой пробкой.